2021年3月22日/医麦客新闻 eMedClub News/--细胞培养也叫细胞培养技术，不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术来说，细胞培养都是一个必不可少的过程，细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。通过细胞培养得到大量的细胞或其代谢产物。因为生物产品都是从细胞得来，所以可以说细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术。
各位老师在细胞培养过程中可能会出现各式各样的问题，下面我们整理了最常见的问题：
细胞为啥总是一言不合就抱团生长？！
是细胞污染了还是正常现象？
是消化不好了还是铺板有问题？
抱团细胞越来越多，怎么样才能让细胞分开生长？
请认真阅读以下干货，看看能否帮您答疑解惑！
细胞生长的时候肯定是要相互联系，大部分的细胞都是要成片生长的，应该仔细观察每种细胞的状态，抱团并不一定代表不好：
1. 若细胞轮廓清晰，可看清楚一个个的细胞，像葡萄一样，一串串的，是状态好的，说明细胞在分裂。
2. 但大部分细胞抱团绝对不是一件好事！如果轮廓消失，出现细胞融解或细胞变灰暗、透光性变差，就是细胞死亡了。葡萄状和抱团，在镜下其实很容易区别。抱团死亡的细胞可以看到细胞碎片，如下图：
3. 细胞抱团是因为细胞污染了吗？一般细胞培养液清亮，就不是污染。如果是污染了的话，可以通过观察培养液颜色，若污染，则很浑浊。
1. 细胞死亡释放出DNA，缠绕其他细胞，形成黏性的细胞团（消化的过程可能过于粗暴，吹打太用力，消化太久，消化液太强或有毒性等）。
3. 消化不完全的时候，细胞和细胞之间的连接没有分开；消化过度的时候，圆形的细胞容易聚堆，再分开很困难！
4. 状态不好、老化的细胞，也可能会出现抱团生长的情况（比如换液不及时、长的太满才传代、污染等造成的细胞状态差）。
5. 传代时没有吹打均匀，细胞团多，培养时就会是一团一团的。
2. 对于贴壁非常牢固的细胞（如MDCK），为了细胞更好的状态，更漂亮的样子，建议分多批多次消化，这样才能最大限度地降低胰酶对细胞的损伤，保证细胞的状态能够最优。
3. 细胞生长密度不要太高，70%－80％就好（细胞刚刚基本成单层细胞，没有出现成层生长），这样细胞抱团的几率就大大减少了。如果细胞已经长成集落，可先将细胞低密度传代，第二天再消化传代，这样连续传三次，细胞抱团就会越来越小，这样几代过后，再按照常规消化方法和时间能将细胞逐渐传成单个的。
4. 消化过程中最好不要使劲摇动培养瓶，这样细胞特别容易成屑样脱落。胞一旦脱落入悬液里就很难再将他吹打成单个（因为细胞没有受力点了，所以细胞很难分散开）。所以必须要在细胞未脱落之前将其吹打开，严格控制好消化程度。
1. 如果细胞抱团不影响生长就没问题，只是计数时较麻烦。在消化时，可在细胞由多角形变成圆型之前，用手轻磕培养瓶的侧壁，使细胞从壁上脱落（最好不要吹打，对细胞形状和生长都不好）。
2. 如果感觉有死细胞的DNA，在细胞悬液中加入几滴无菌的DNAse（1mg/ml溶于水）将DNA链打断。轻柔地吹打细胞，防止对细胞膜造成物理损伤。
3. 如果细胞抱团是肉眼可见的，可让细胞静置半分钟左右，然后吸取上半部分没有抱团的细胞悬液来传代。如果细胞抱团肉眼不可见，目前还没有特别好的分离方法，只能等细胞状态改善后将这部分细胞慢慢排除出去。
引起细胞抱团的根本原因是细胞状态变差，且在吹打细胞的时候，那些状态好的细胞也会因为多次吹打而受损，所以我们认为最根本的解决方法是摸透培养的细胞的生长习性，让细胞保持较好的生长状态。
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